水产品孔雀石绿、结晶紫的速测技术

4.5.1概述

孔雀石绿是一种带有金属光泽的绿色结晶体，又名碱性绿、严基块绿、孔雀绿。它既是杀真菌剂，又是染料，易溶于水，溶液呈蓝绿色。研究结果表明，孔雀石绿具有高毒素、高残留和致癌、致畸、致突变等副作用。鉴于孔雀石绿的危害性，我国将孔雀石绿列入《食品动物禁用的兽药及其化合物清单》。

以往，孔雀石绿残留量测定采用液相色谱法，操作复杂，需要专业实验人员，仪器工作环境要求高，不能满足现场检测需求。与此相比，孔雀石绿定性快速检测试剂盒法的检测步骤较简单，技术条件要求低，大大缩短了测定时间，同时也降低了检测成本。

4.5.2水产品孔雀石绿、结晶紫的速测技术—速测盒法

1.速测原理

水产品中的孔雀石绿、结晶紫及其代谢产物无色孔雀石绿、无色结晶紫经过前处理后，样液经过孔雀石绿SPE小柱富集形成有色环带，可初步判断样品中是否含有有色孔雀石绿、结晶紫。用洗脱剂将柱上待检物洗脱下来，经柱衍生化后，加萃取剂，若萃取剂有明显的绿色或紫色说明样品中含有待检物质。将萃取剂取出滴于白色点滴板上，可在板上形成绿色或紫色环斑，从而可准确定性样品中是否含有孔雀石绿或结晶紫。

2．速测范围

本法用于检测鱼类、虾类等孔雀石绿、结晶紫、无色孔雀石绿、无色结晶紫成分，适用于市场监督部门、水产监督部门对水产品的现场及化验室检测监控。

本方法使用的试材由北京中卫食品科技公司、广州天河绿洲生化研究中心提供。

3．方法特点

(1)可现场操作，用于快速筛选法。

(2)检测速度快，检测一个样品30min左右，可多残留分析。

(3)不需其他试剂，检测成本低。

(4)不需做对照实验，特异性高，可准确定性，检测下限1.0ug/kg。

4．速测步骤与结果判定(实验室快速按照A，现场快速按照B)

(1) A取水产品可食部分用绞肉机绞碎后，准确称取10.0g于100mL离心管中，加入提取剂1、提取剂2各一瓶，振摇5min后，4000rpm离心5min，取上清液10mL于100mL量筒中，用蒸馏水定容至30mL。

B用剪刀剪取约10g样品于研钵中，加入一瓶提取剂2研碎后，再加入一瓶提取剂1继续研磨约3～5min，用滤纸过滤后挤干残渣，收集滤液10mL于100mL量筒中，用蒸馏水定容至30mL。

(2)层析柱激活。层析柱在使用前依次加入2mL洗脱剂、5mL蒸馏水，吸耳球上加压，废液舍弃。

(3)过层析柱。将50mL注射器与层析柱连接，将步骤(1)中收集到的样液倒入注射筒里，用注射塞加压，加快流速，建议30mL样本通过柱子的时间为5～8min，待样液*流干，弃去流出液，然后依次加2mL洗涤剂及2mL蒸馏水于层析柱中，吸耳球上加压，废液舍弃。

(4)结果初判。观察层析柱中吸附剂颜色变化，若吸附剂逐渐形成绿色环带，可初步判断样本中含有孔雀石绿；若吸附剂逐渐形成紫色环带，可初步判断样本中含有结晶紫；加0.8mL洗脱液于层析柱中，吸耳球上加压，用离心管1收集流出液，根据液体颜色来判断。

(5)衍生化。依次加2mL洗脱液及2mL蒸馏水于层析柱中，吸耳球上加压，废液舍弃，将一瓶衍生化试剂倒入层析柱中，加入2mL蒸馏水用吸耳球从上口加压挤干；弃去流出液，将步骤(4)中离心管1的洗脱液加入柱中，吸耳球上加压，用离心管2收集流出液，再用0.8mL洗脱液于层析柱中，吸耳球上加压，用此离心管2收集混匀。

(6)萃取。取步骤(5)中的离心管2，加入0.5mL蒸馏水后，再加入0.5mL萃取剂，扣上管塞混匀静置，离心管2下层若有明显的绿色或紫色则可判断样品中含有孔雀石绿或结晶紫，若无明显的绿色或紫色需进一步的判断。

(7)检测。用1mL注射器取步骤(6)中离心管2中的下层萃取液(注意不要吸到上层的液体)，加到白色点滴板的一个孔上，样液渐渐挥干，若在孔上形成绿色斑环说明样品中含有孔雀石绿，形成紫色斑环样品中含有结晶紫。

文章来源：《食品安全快速检测技术》

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