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标准菌种使用需要注意的地方及保存的方法

发布时间:2020-09-11浏览:71次
       标准菌种使用注意事项:
  1、标准菌种是不可以从冰箱中取出直接使用的,需在实验前进行活化;
  2、从标准菌株到实验使用的菌悬液的传代次数应不得超过5代,以防止过度的传代增加菌种变异的风险。在2015版药典“9203药品微生物实验室质量管理指导原则”中明确指出:任何形式的转种均被认为是传代1次。
  3、标准菌株复苏后的一代,一般是不保存的,因为菌种刚刚从冻干粉的状态复苏,活性还未恢复到不错的状态,再复壮而得的二代菌种,也就是标准储备菌株,需进行纯度和特性的确认,这个确认记录可证明在操作过程中,菌株未污染杂菌且活性与标准菌株一致。
  4、保藏时应选择适宜的菌种保存方法,并注意标示必须清晰明确。由于在试验过程中,实验菌种的活性和特性依赖于合适的试验操作和贮藏条件,大家也越来越重视实验菌种的状态,如果保藏方法及管理不善,菌种优良特性便会退化、丧失,甚至导致死亡,就会影响实验结果。
  标准菌种的保存使用
  1、新引进的菌种经形态、染色、培养性状、生化特性等的鉴别确定后作记录,并进行保存。
  2、长期保存的储存菌株以冷冻干燥保藏为主,特殊要求的菌种可用其它方法进行保存,保存期可长达几年至几十年。
  3、半储存菌株以含20%甘油的肉汤或液体石腊封存的半固体琼脂为主,在0℃以下保存,保存期为3-6个月。
  4、应用菌株以琼脂斜面为主,在4℃保存,保存期为1-3个月。
  5、菌种的传代不可超过6次。视菌种的特性及使用情况,一般储存菌株每5年传记代一次,每1-2年从储存菌株转接至半储存菌株,半储存菌株每3-6个月传代一次,每1-3个月从半储存菌株转接接至应用菌株。
  6、每次检验用的菌株必须是从应用菌株转接的新鲜菌株。每支应用菌株用两次后必须销毁(121℃,0.1MPa高压灭菌处理15分钟以上)。
  7、各级保存的菌株应有明确的编号、名称、传代数、日期等到标识。
  8、菌种的收发、保存、使用、传代等应及时认真详细地登记,以备查核。
  9、在保存过程中,如发生污染退化等问题,应及时报告,以便处理。
  倍增时间不是代数,倍增时间是菌株特性,不同菌株起菌快慢不一样,具体工艺需要结合倍增时间、培养基及生长曲线等进行设计
  对数生长期细胞的生长速率快速拉升,期间微生物的比生长速率最大,且菌体生长不受基质浓度限制,繁殖速率极快,细胞数量或质量等生物量一般呈指数增长,根据比生长速率定义有:
  μ=dCX/dt▪1/CX
  积分变形可得:
  lnCX1=lnCX0+μ▪t
  继续变形:
  μ▪t=(lnCX1-lnCX0)
  则倍增时间td:
  =lnCX1-lnCX0/μmax
  =ln(2/1)/μmax
  =0.693/μmax
  其中:
  μ:比生长速率
  CX0:起始菌体浓度(g/L)
  CXt:经过一段时间t后的菌体浓度(g/L)
  CX:菌体浓度泛指(g/L)
  td:菌体浓度增大一倍时所需要的时间min