标准菌种使用需要注意的地方及保存的方法

　　1、标准菌种是不可以从冰箱中取出直接使用的，需在实验前进行活化；

　　2、从标准菌株到实验使用的菌悬液的传代次数应不得超过5代，以防止过度的传代增加菌种变异的风险。在2015版药典“9203药品微生物实验室质量管理指导原则”中明确指出：任何形式的转种均被认为是传代1次。

　　3、标准菌株复苏后的一代，一般是不保存的，因为菌种刚刚从冻干粉的状态复苏，活性还未恢复到不错的状态，再复壮而得的二代菌种，也就是标准储备菌株，需进行纯度和特性的确认，这个确认记录可证明在操作过程中，菌株未污染杂菌且活性与标准菌株一致。

　　4、保藏时应选择适宜的菌种保存方法，并注意标示必须清晰明确。由于在试验过程中，实验菌种的活性和特性依赖于合适的试验操作和贮藏条件，大家也越来越重视实验菌种的状态，如果保藏方法及管理不善，菌种优良特性便会退化、丧失，甚至导致死亡，就会影响实验结果。

　　标准菌种的保存使用

　　1、新引进的菌种经形态、染色、培养性状、生化特性等的鉴别确定后作记录，并进行保存。

　　2、长期保存的储存菌株以冷冻干燥保藏为主，特殊要求的菌种可用其它方法进行保存，保存期可长达几年至几十年。

　　3、半储存菌株以含20%甘油的肉汤或液体石腊封存的半固体琼脂为主，在0℃以下保存，保存期为3－6个月。

　　4、应用菌株以琼脂斜面为主，在4℃保存，保存期为1－3个月。

　　5、菌种的传代不可超过6次。视菌种的特性及使用情况，一般储存菌株每5年传记代一次，每1-2年从储存菌株转接至半储存菌株，半储存菌株每3-6个月传代一次，每1-3个月从半储存菌株转接接至应用菌株。

　　6、每次检验用的菌株必须是从应用菌株转接的新鲜菌株。每支应用菌株用两次后必须销毁（121℃，0.1MPa高压灭菌处理15分钟以上）。

　　7、各级保存的菌株应有明确的编号、名称、传代数、日期等到标识。

　　8、菌种的收发、保存、使用、传代等应及时认真详细地登记，以备查核。

　　9、在保存过程中，如发生污染退化等问题，应及时报告，以便处理。

　　倍增时间不是代数，倍增时间是菌株特性，不同菌株起菌快慢不一样，具体工艺需要结合倍增时间、培养基及生长曲线等进行设计

　　对数生长期细胞的生长速率快速拉升，期间微生物的比生长速率大，且菌体生长不受基质浓度限制，繁殖速率极快，细胞数量或质量等生物量一般呈指数增长，根据比生长速率定义有：

　　μ=dCX/dt▪1/CX

　　积分变形可得：

　　lnCX1=lnCX0+μ▪t

　　继续变形：

　　μ▪t=（lnCX1－lnCX0）

　　则倍增时间td：

　　=lnCX1－lnCX0/μmax

　　=ln（2/1）/μmax

　　=0.693/μmax

　　其中：

　　μ：比生长速率

　　CX0：起始菌体浓度（g/L）

　　CXt：经过一段时间t后的菌体浓度（g/L）

　　CX：菌体浓度泛指（g/L）

　　td：菌体浓度增大一倍时所需要的时间min