四环素类药物残留的速测技术—速测盒法

四环素广泛用做抗菌药，四环素类抗生素主要包括土霉素、四环素(TC)和金霉素(CTC)，目前常用于预防和治疗动物疾病。如果不合理地使用该类药物，如剂量过大，用药时间过长，滥用药物以及不遵守休药期提前屠宰等都会使该类药物残留于动物组织及牛乳中，被人们食用后带来极大危害，可造成致畸、致癌。为了有效预防四环素类药物的滥用，我国明确规定四环素类药物在牛乳中的大残留*。

1．速测原理

采用间接竞争ELISA方法，在微孔条上预包被偶联抗原，样本中的残留物四环素类药物将和微孔条上预包被的偶联抗原竞争四环素类药物抗体，加入酶标记物后，用TMB底物显色，样本吸光值与其所含残留物四环素类药物的含量成负相关，与标准曲线比较可得出相应残留物四环素类药物的含量。

2．速测范围

本法适用于动物组织(猪、鸡、鱼、虾)、牛乳、蜂蜜中的四环素类药物残留。检测下限10ug/kg。

3．速测步骤

(1)取约5g样品于研钵中，加入一瓶提取剂研磨约3～5min，用滤纸过滤后挤干残渣，收集滤液5mL。

(2)依次加2mL再生剂、5mL蒸馏水于层析柱中，吸耳球上加压，废液舍弃，将滤液加入层析柱过柱，吸耳球上加压，废液舍弃，待滤液流干后，用5mL蒸馏水(纯净水)于层析柱中，吸耳球上加压，废液舍弃。

(3)用0.8mL洗脱剂加到此层析柱中，吸耳球上加压，接流出液于点滴板上，自然挥干后，用0.3 mL PBST充分溶解残留物，将液体移取到5mL离心管中，加0.3mL净化剂，振摇，静置，吸取至少100uL下层溶液待检。

4．结果判定(图4-4)

(1)阴性(-)。T线(测试线，靠近加样孔一端)比C线(对照线)深或一样深，表示样品中四环素浓度低于检出限或不含四环素残留物。

(2)阳性(+)。T线比C线浅，或T线无显色，表示样品中四环素浓度高于检出限；T线比C线越浅，表示样品中四环素浓度越高。

(3)无效。未出现C线，表示操作过程不正确或试剂板已变质失效。此情况下，应仔细阅读说明书，并用新的试剂板重新测试。

5．说明

(1)使用前将试剂板和待检样本溶液恢复至室温；

(2)尽量不要触摸试剂板中央的白色膜面；

(3)层析柱再生：层析柱可重复使用，用完后的层析柱依次加2mL再生剂及5mL蒸馏水于层析柱中，吸耳球上加压，废液舍弃。可备下次使用。

文章来源：《食品安全快速检测技术》

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