进出口动物源食品中克拉维酸残留量检测方法（一）

1 范围

本标准规定了动物源食品克拉维酸残留量的液相色谱-质谱/质谱测定和确证方法。

本标准适用于猪肉、猪肝、猪肾、牛肉、牛肝和牛奶等动物源食品中克拉维酸残留量的测定和确证。

2 规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的心版本。凡是不注明日期的引用文件，其心版本适用于本标准。

GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法

3 方法提要

试样中残留的克拉维酸用pH6.0的三羟甲基氨基甲烷(Tris)缓冲液-乙腈提取，二氯甲烷-正己烷液液分配净化，分子筛超滤，用液相色谱-质谱/质谱仪检测和确证，外标法定量。

4 试剂和材料

除特殊规定外，所用的试剂均为分析纯，水为符合GB/T 6682规定的一级水。

4.1 甲醇：HPLC级。

4.2 乙腈; HPLC级。

4.3 二氯甲烷。

4.4 正己烷。

4.5 酸性氧化铝。

4.6 三羟甲基氨基甲烷(Tris)。

4.7 盐酸。

4.8 pH6.0的5 mmol/L Tris缓冲溶液：称取0.61g Tris(4.6)，用约900 mL水溶解，用盐酸(4.7)调pH值6.0，定容至1000 mL

4.9 克拉维酸钾(clavulanic acid potassium, CAS号：61177-45-5)标准品，纯度大于等于99%。

4.10 标准储备溶液，5000 mg/L：称取59.5mg克拉维酸钾(相当于50 mg克拉维酸)标准品(4.9),用少量pH6.0的5 mmol/L Tris缓冲溶液(4.8)溶解，再用乙腈(4.2)定容至10mL容量瓶，-30℃下避光保存。

4.11 标准中间溶液，5 mg/L：吸取0.1 mL标准储备溶液(4.10)于100 mL容量瓶，用乙腈定容至刻度，充分混匀，配制成5 mg/L标准中间溶液，此标准溶液需于分析前临时配制。

4.12 标准工作溶液：根据灵敏度和使用需要，空白基质提取液将标准中间溶液(4.11)稀释成标准工作溶液，此标准工作溶液现用现配。空白基质提取液为不含克拉维酸的空白样品按7.1步骤提取后得到。

4.13 超滤离心管，带相对分子质量30 000的分子筛。

5 仪器与设备

5.1 液相色谱-质谱/质谱仪：配电喷雾离子源。

5.2 分析天平：感量0.1mg和0.01g。

5.3 旋涡混合器。

5.4 低温离心机：转速不低于5000r/min，可制冷到-4℃。

5.5 均质器：转速不低于10 000 r/min。

5.6 pH计。

6 样品制备与保存

6.1 制样要求

制样操作过程中应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。

6.2 动物肌肉、肝脏和肾脏

从所取全部样品中取出有代表性样品可食部分约500 g，用组织捣碎机充分捣碎均匀，均分成两份，分别装入洁净容器中，密封，并标明标记，于-18℃以下冷冻存放。

6.3 牛奶样品

从所取全部样品中取出有代表性样品约500 g，充分混匀，均分成两份，分别装入洁净容器中，密封，并标明标记，于-18℃以下冷冻存放。

7 测定步骤

7.1 样品提取

7.1.1 肌肉、肝脏、肾脏

称取约5g试样(至0.01g)，于50 mL离心管中，加入约2g酸性氧化铝(4.5)，再加入5. 0 mL pH6.0的5 mmol/L Tris缓冲溶液(4.8)和9.0 mL乙腈(4.2)，振荡提取5 min, 10℃以下以5000r/min离心5 min，移取上清液至另一50 mL离心管，加入20mL正己烷-二氯甲烷(2+1)混和溶液，振荡约2min, 10℃以下以5000r/min离心5 min，取下层(水相)清液至15 mL离心管，用水定容至10 mL，振荡混匀，取约1 mL于超滤离心管中离心过滤，供液相色谱-串联质谱仪测定。

7.1.2 牛奶

称取约5g试样(至0.01g)，于50 mL离心管中，加入约2g酸性氧化铝(4.5)，再加入1.0mL pH6.0的5 mmol/L Tris缓冲溶液(4.8)和9.0 mL乙腈(4.2)，振荡提取约5 min, 10℃以下以5000r/min离心5 min，移取上清液至另一50 mL离心管，加入20 mL正己烷-二氯甲烷((2+1)混和溶液，振荡约2 min, 10℃以下以5000r/min离心5 min，取下层(水相)清液至15 mL离心管，用水定容至10 mL，振荡混匀，取约1 mL于超滤离心管中离心过滤，供液相色谱-串联质谱仪测定。

文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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