EHS细胞-临床医学

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经营范围：国家标准物质、进口标准品、冶金标样、标准气体、药典对照品、标准菌种、实验室耗材、试剂盒

产品信息：EHS细胞-临床医学

标准名称：EHS细胞-临床医学

产品简介：

<1>细胞培养

• 细胞请于细胞培养箱中培养，大部分细胞是37℃，5% CO2，湿度100%环境下培养的。有极少部分细胞培养条件不*，请仔细阅读相应的细胞说明书，使用正确的培养基及培养条件；
• 细胞于培养瓶或皿中培养，加入适量说明书上标注的细胞相应*培养基（一般液面高度2-3mm即可）。

<2>细胞传代（以下步骤适用于10cm皿）

• 细胞培养至密度达80%以上时即可传代，先将细胞培养基取出3mL用15mL离心管装好，其他培养基全部吸干舍弃；
• 培养皿加入2-3mL无菌PBS，轻轻晃动皿，使PBS浸洗到皿底所有部位，PBS吸干舍弃；
• 加入1mL胰酶，轻轻晃动皿，使胰酶浸没到皿底所有部位，将皿盖好放入培养箱中消化；

3min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞不再贴壁，即可加入*步收集的培养基混匀；

• 若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至不贴壁为止；
• 将细胞悬液均匀分成几份，分别加入不同培养皿中，补加新培养基后放回培养箱培养。

<3>相关问题

• 部分细胞在传代后时，会有以下现象：细胞内会有黑色小点、细胞间隙有些颗粒物、培养基漂浮一些死细胞或者细胞长的极慢。出现以上现象时，可以咨询本公司技术人员此现象是否正常及相关处理方式，不要频繁换液，大多数细胞1周换液2-3次即可。
• 细胞碎片较多、背景较脏时，贴壁细胞用PBS漂洗两次、悬浮细胞打散后低速离心（900rpm，3min）能有效改善。
• 传代比例建议1:2-1:3，长得比较快的细胞可以1：3，比较慢的按1:2传代。传代后，建议不要使用传代前培养所使用的培养基，会有大量细胞碎片甚至导致细胞死亡的风险。
• 细胞状态不好或者生长极慢的时候，可以通过增加血清浓度调整细胞状态及生长速度。
• 请不要随意更换培养基，因实验需要，可以逐步驯化。

悬浮传代：混匀细胞，收集细胞悬液900-1000rpm离心3min，弃上清。再加5ml PBS重悬细胞，再离心后，用*培养基重悬接种到新的培养皿。第二次PBS重悬是为了去除碎片，如果平时碎片比较少，传代时可以省略PBS重悬的步骤；如果碎片很多，建议PBS多洗一次。

• 细胞冻存

<1>冻存操作

• 冻存液配方：建议使用92%FBS+8%DMSO，客户自身实验室所使用的冻存液也可以适用，血清浓度不低于30%，DMSO含量不高于12%即可。
• 收集细胞按照以上细胞传代步骤操作至第④步后，将细胞悬液收集入15mL离心管，离心（1200rpm，3min）；
• 弃上清，加入配制好的冻存液，重悬细胞，悬液加入无菌冻存管中；
• 将冻存管在4℃静置10min，后将之正置于室温下的厚壁有盖泡沫盒中，盖紧盒盖，放入-80℃冰箱过夜，第二天放入液氮即可长期保存。

<2>相关问题

• 10cm皿的细胞长满一般可以冻存2-3管，部分细胞长的比较慢，冻存的细胞密度要稍微大点，以防止复苏后生长困难。
• 冻存液中含的DMSO请使用细胞级DMSO，同时浓度不要太高。部分细胞在10%DMSO条件下冻存会死亡，所以DMSO浓度5%-8%是比较推荐的浓度。
• 细胞冻存及复苏遵循慢冻快融的原则，即冻存时温度不能急剧下降，应控制温度缓慢下降。复苏时应快速融化，融化后尽快加入培养基中。
• 冻存时建议设置冻存检测，即取0.2-0.3mL的冻存液重悬的细胞于一个冻存管中，与正常体积冻存的细胞共同冻存，至液氮后复苏检查冻存结果。冻检合格前，留一部分细胞继续培养，以防万一。

另外，我们提供各种不同浓度的单标及混标定制服务，包含【十大系列】（真诚合作，诚招代理）：

· 中药对照品

· 分析滴定液

· 指示剂溶液

· 农残类标准溶液

· 水质检测标准溶液

· TOC/TIC标准液

· 原子吸收光谱仪标准液

· PH缓冲液（PH校正液@25℃）

· 比色计标准液（铂钴比色标准液）

· 离子层标准液（阴离子标准液、阳离子标准液）

公司简介：

中国标准物质网隶属于北京普天同创生物科技有限公司，是国内最早的专业化标准物质信息平台。创建以来，一直专注于标准物质的推广与销售，是多家知名标准物质研制单位和分析仪器公司的代理商，代理销售国内外数万种标准物质和标准样品，同时经营各类精细化工产品及计量设备，业务遍及国内外众多检测机构、科研院校和工厂企业，在业界具有较强的影响力。